Суточный анализ мочи на копропорфирин. Анализ мочи общий (Анализ мочи с микроскопией осадка). Когда назначается исследование

Порфирины - циклические соединения, образованные четырьмя пиррольными кольцами, связанными между собой метенильными мостиками, синтезируются из глицина и сукцинил-CoA через образование δ-аминолевулиновой кислоты и порфобилиногена.

Порфирины способны образовывать комплексы с ионами металлов, связывающихся с атомами азота пиррольных колец. Примерами служат железопорфирины, в частности гем, входящий в состав гемоглобина, и магнийсодержащий порфирин - хлорофилл - пигмент растений, участвующий в фотосинтезе.

Превращение порфобилиногена в порфирин может происходить просто при нагревании в кислой среде (например, в кислой моче), в тканях это превращение катализируется специфическими ферментами. Все порфириногены бесцветны, тогда как все порфирины окрашены.

Копропорфирины I и III растворимы в смесях эфира и ледяной уксусной кислоты, из которых их можно экстрагировать соляной кислотой. Уропорфирины, напротив, в этих смесях нерастворимы, но частично растворимы в этилацетате, и их также можно экстрагировать соляной кислотой. Полученные солянокислые растворы при облучении ультрафиолетовым светом дают красное флюоресцентное окрашивание. Характерные полосы поглощения могут быть зарегистрированы с помощью спектрофотометра.

Последовательно образующиеся в процессе синтеза гема из δ-аминолевулиновой кислоты интермедиаты становятся все более гидрофобными. Это повышение гидрофобности отражается на распределении интермедиатов синтеза гема в составе мочи и кала. Более полярный уропорфири-ноген экскретируется преимущественно с мочой, а более гидрофобные копропорфириноген и протопорфириноген оказываются преимущественно в желчи и удаляются с калом.

Унифицированный метод определения порфобилиногена с пара-диметиламинобензальдегидом

Принцип метода . При реакции порфобилиногена с пара-диметиламинобензальдегидом образуется соединение красного цвета. Повышение специфичности реакции достигается добавлением ацетата натрия. Уробилиноген, производные индола, скатола и другие соединения, дающие аналогичную реакцию с пара-диметиламинобензальдегидом, удаляют экстракцией бутанолом и хлороформом, в которых порфобилиноген нерастворим.

Реактивы . 1) пара-диметиламинобензальдегид; 2) концентрированная соляная кислота; 3) реактив Эрлиха: 0,7 г пара-диметиламинобензальдегида растворяют в 150 мл концентрированной соляной кислоты, приливают 100 мл дистиллированной воды и смешивают. Раствор должен быть бесцветным или слегка желтым. Хранят в посуде из темного стекла, стабилен; 4) насыщенный раствор ацетата натрия: 375 г CH 3 COONa × ЗН 2 O или 226 г CH 3 COONa растворяют в 250 мл теплой дистиллированной воды. Раствор должен быть бесцветным и прозрачным, хранят его при температуре 20 °С; 5) хлороформ; 6) бутиловый спирт; 7) индикаторная бумага для измерения pH в интервале 4,0–5,0.

Постановка пробы . Исследуют мочу в первые 2–3 ч после мочеиспускания. В пробирке смешивают по 2,5 мл мочи и реактива Эрлиха, добавляют 5 мл насыщенного раствора CH 3 COONa, перемешивают. Измеряют pH, который должен быть в пределах 4,0–5,0. При pH меньше 4,0 пробу подщелачивают раствором ацетата натрия.

Оценка результатов . При отсутствии развития окраски результат считается отрицательным. Если проба окрашивается в розовый или красный цвет, в пробирку добавляют 5 мл хлороформа и встряхивают. Окрашивание хлороформа при бесцветном или слегка желтоватом верхнем слое также позволяет считать пробу отрицательной. Если окрашенным остается слой над хлороформом, то 6–8 мл из него переносят в другую пробирку, добавляют бутанол в соотношении 1: 2 и встряхивают. При плохом разделении слоев жидкостей пробу центрифугируют. Окрашивание бутанола свидетельствует о низком содержании порфобилиногена - проба также отрицательна. Если окрашенным остается исследуемый слой, то в моче концентрация порфобилиногена выше нормальной. В норме концентрация порфобилиногена в моче - до 2 мг/л. Данным методом порфобилиноген определяется при концентрации более 6 мг/л.

Примечание : при хранении мочи более 3 ч при комнатной температуре положительная реакция может стать отрицательной, что связано с превращением порфобилиногена в порфирин в кислой среде и образованием ингибиторов реакций. При невозможности исследования мочи в первые 2 ч хранить ее необходимо в холодильнике при 4‘°С, доведя pH до 6,0–7,0. В этих условиях порфобилиноген стабилен в течение длительного времени.

Клиническое значение определения порфиринов

Принято различать первичные и вторичные порфинурии. К первым, обычно называемым порфириями, относят группу наследственных заболеваний, для каждого из которых характерен набор экскретируемых с мочой порфиринов и их предшественников. Вторичные порфинурии возникают вследствие нарушения функций печени или кроветворных органов в результате каких-либо первичных заболеваний, например тяжелых гепатитов, интоксикаций свинцом, фосфором, алкоголем, бензолом, четыреххлористым углеродом, некоторых злокачественных опухолях и аллергических состояниях, циррозах печени и т. п. При вторичных порфинуриях в моче обнаруживаются значительные количества копропорфиринов.

У здоровых людей с мочой за сутки в норме выводится в среднем около 67 мкг копропорфиринов; на изомер I типа приходится в среднем 14 мкг/сут, на изомер III типа - 53 мкг/сут. Отклонения в этом соотношении могут служить диагностическим признаком при некоторых заболеваниях печени.

Порфирия - группа врожденных расстройств, обусловленных дефектом синтеза гема - железосодержащей части . - приобретенная.

Критерии диагноза

1. характерные симптомы и лабораторные данные
2. идентификация порфирина и метаболитов синтеза гема в стуле, плазме ,
3. измерение активности ферментов
4. генетическое тестирование

У бо­лее 80% гетерозиготных пациентов порфирия протекает бессимптомно.

По клиническому течению заболевания часто порфирии делят на острые формы порфирии и формы, протекающие преимущественно с поражением кожных покровов.

Острые приступы порфирии могут включать абдоминальные боли и нарушение психики, парестезии, лихорадку, реже - судороги, нейромышечную слабость, . Острые приступы порфирии характерны для острой интермиттирующей порфирии, копропорфирии. Возникновение приступа провоцируются лекарствами (особенно барбитураты, алкоголь и сульфаниламиды; также дифенилгидантоин, хлордиазепоксид, эргометрин, некоторые стероиды и др.), инфекцией, голоданием.

Единственным сипмтомом острого приступа порфирии может быть резкое повышение в крови уровня порфобилиногена.

У пациентов с бессимптомным носительством может быть всего несколько острых приступов порфирии за всю жизнь, причем уровни аминолевулиновой кислоты, порфобилиногена и порфирина в моче, кале, крови могут оставатся в норме.

Лабораторная диагностика

Для подтверждения диагноза острой порфирии лабораторные данные должны включать:

• суточное количество в моче 5-аминолевулиновой кислоты,
• порфобилиноген в моче,
• уропорфирин в моче,
• копропорфирин в моче; моча должна быть заморожена, так как порфирин быстро разрушается, особенно при комнатной температуре.,
• порфирин плазмы,
• свободный протопорфирин эритроцитов,
• кал для количественного определения копропорфирина и протопорфирина,
• тест Уотсона-Шварца показывает количество порфирина в моче (в мочу добавляют реактив Эрлиха или ацетат натрия; положительным считается, если при добавлении хлороформа произошло окрашивание в вишнево-красный цвет), является количественным, но низкочувствительным.

Важно!

• Доказательством порфирии служит гемолитическая анемия или за­болевание печени; флуоресценция в соответствующих тканях и определение активности фермен­тов в эритроцитах ткани печени и культуре фибробластов. Читайте о диагностике анемии в статье « ».
• Уровня аминолевулиновой кислоты и порфобилиногена измеряют во время острых приступов порфирии.
• Некоторые лекарства могут провоцировать приступы порфирии (стимулиру­ют синтез гема, воздействуя на аминолевулиновую кислоту), например, алкоголь, антипиретики, барбитураты, эстро­гены, фенилгидразин, фенитоин и сульфаниламиды.
• Измерение активности ферментов и анализ ДНК способствуют определению типа порфирии.
• Тесты на порфирин в моче (флуорометрический метод) - некоторые препараты тоже провоцируют флуоресценцию, например, акрифлавин, этоксазин, сульфаметоксазол, тетрациклин, фенозопиридин.

Классификация порфирии

1. Эритропоэтические формы

• Эритропоэтическая копропорфирия.

2. Печеночные формы

3. Гепатоэритропоэтические формы

• Гепатоэритропоэтическая порфирия.

Сравнение типов порфирии

	Дефект фермента	Локус мутации	Начало болезни	Частота встречаемости
Порфирия, вызванная дефицитом аминолеву-линатдегидратазы	дегидратаза аминолевулиновой кислоты, ~ 5% нормы	аутос. рецес. 9q34 7 мутаций	вариабельно	описано лишь несколько случаев
Острая перемежающая­ся порфирия	дезаминаза порфобилиногена, 50% нормы	аутос. домин. 11 q23.3 более 227 мутаций	редко до зрелого возраста	Лапландия: 1:1000; везде 1,5:100000
Врожденная эритропоэ­тическая порфирия	уропорфириноген-III-косинтаза	аутос. рецес. 10 q25.2-26.3	в утробеи при рождении	менее 200 описан­ных случаев
Кожная порфирия	уропорфириноген-декарбоксилаза	приобретенная также аутос. домин. 1р34	30-40 лет	часто в США и Европе
Гепатоэритропоэтиче­ская порфирия	уропорфириноген-декарбоксилаза	аутос. рецес.	до 2 лет	менее 20 описанных случаев
Наследственная копро­порфирия	копропорфирино-геноксидаза, 50% нормы	аутос. домин. 3 ql2 36 мутаций	в любой период	менее 50 описанных случаев
Смешанная порфирия	протопорфириногеноксидаза,	аутос. домин. lq22 120 мутаций	обычно в 15-30 лет	Южная Африка 3:1000; в других регио­нах редко
Эритропоэтическаяпротопорфирия	феррохелатаза	аутос. домин. 18 q21.3	1-4 года	менее 50 описанных случаев

Пофирия was last modified: Ноябрь 10th, 2017 by Мария Салецкая

Острая перемежающаяся порфирия (ОПП) — это наследственное заболевание, относящееся к группе порфирий, в основе которых лежит нарушение биосинтеза гема, что ведет к накоплению в органах и тканях порфобилиногена (ПБГ) и δ-аминолевулиновой кислоты (АЛК), оказывающих токсическое воздействие на организм и обуславливающих типичную клиническую симптоматику. Заболевание обычно манифестируется в молодом и зрелом возрасте, и из всех видов порфирий именно ОПП выделяется неблагоприятным прогнозом. Примерно один человек из 20 тысяч является бессимптомным носителем патологического гена, а каждый из 100 тысяч страдает ОПП. Трудность диагностики ОПП заключается в том, что она протекает под маской неврологических и психических заболеваний.

ОПП передается по аутосомно-доминантному типу, связанному с мутацией генов 11 хромосомы и генетическим дефектм уропорфириногенсинтетазы, что приводит к резкому увеличению ПБГ, АЛК и дисфункции периферической нервной системы и ЖКТ. У большинства носителей патологического гена, болезнь на протяжении жизни может так и не проявиться, однако различные неблагоприятные факторы способствуют ее манифестации. К ним относятся:

• различные лекарственные препараты;
• ядохимикаты;
• алкогольная интоксикация;
• предменструальный период;
• беременность;
• ограничение потребления пищевых продуктов;
• инфекционные заболевания;
• стрессы.

Под воздействием этих факторов болезнь принимает острое течение, которое делает возможным ее верификацию. Следует отметить, что при несвоевременной диагностике и неадекватном лечении этого недуга, умирает 60 человек из каждых ста заболевших. В то же самое время, своевременная диагностика и адекватная терапия позволяют спасти подавляющее большинство больных, сохранив им приемлемое качество жизни.

Симптомы острой перемежающейся порфирии

• длительные, приступообразные боли в брюшной полости;
• тошнота;
• рвота;
• задержка стула;
• увеличение частоты сердечных сокращений;
• повышение артериального давления;
• снижение тонуса мышц;
• боли в конечностях;
• снижение кожной чувствительности;
• дисфагия;
• потеря голоса;
• параличи и парезы;
• паралич дыхания;
• инсомния;
• эмоциональная нестабильность;
• склонность к депрессии;
• истероидный тип личности;
• спутанность сознания;
• зрительные и слуховые галлюцинации;
• судорожные припадки;
• фотосенсибилизация;
• гиперпигментация кожи;
• окраска мочи во все оттенки красного цвета.

Особенно тяжело СПП протекает во время беременности и часто заканчивается летально.

Диагностика

При наличии характерной клинической симптоматики проводятся следующие подтверждающие исследования:

• Реакция мочи с реактивом Эрлиха положительная.
• Определение общих порфиринов, ПБГ и АЛК в моче: уровень повышен.
• Определение общих порфиринов в кале: уровень повышен.
• Молекулярно-генетическое исследование: выявление носительства мутантного гена.

В период реконвалесценции и ремиссии все показатели нормализуются, что в большинстве случаев не позволяет верифицировать заболевание.

Лечение острой перемежающейся порфирии

Начинается с устранения провоцирующих факторов, ограничением в рационе жиров и увеличением количества углеводов. При амбулаторном лечении больные обычно принимают сухой порошок глюкозы. Патогенетическая медикаментозная терапия проводится препаратом Нормосанг в/в в дозе 3-4 мг/кг в сутки в течение от 4 до 8 суток подряд, что приводит к купированию приступа ОПП. В острой фазе ОПП применяется циметидин в дозе 800 мг в день, продолжительность терапии которым определяется индивидуально. Назначаются гемодиализ, плазмаферез, гемоперфузия. Женщинам купируют наступление менструаций. Симптоматическая терапия направлена на коррекцию неврологической, психотической симптоматики, купирование болевого синдрома, снижение артериального давления, купирование тахикардии. Обязательны: соблюдение личной гигиены, массаж, ЛФК. Чем в более молодом возрасте началось заболевание, тем серьезней прогноз. Всем больным и их ближайшим родственникам рекомендуется носить с собой памятку о наличии у них порфирии, для предотвращения введения провокативных лекарственных препаратов в случае оказания ургентной медицинской помощи.

Характеристика Показатели Инструкция Показания Образец анализа

Профиль порфиринов в моче информирует о степени токсической нагрузки на организм токсическими соединениями внешней среды.

Анализ позволяет получить важную клиническую информацию о:

• тяжести воздействия на организм токсических металлов (ртуть, мышьяк, алюминий, свинец), органотоксинов (гексахлоробензен, диоксин, полиброминиловый бифенил, метилхлорид);
• токсичности фармакологических препаратов.
• эффективности лечения , направленного на снижение токсического воздействия и выведение накопленных токсинов, за длительный промежуток времени, из систем организма.

Порфирины — это промежуточные соединения в синтезе гема, являющегося частью молекулы гемоглобина. Гем имеет важное значение для нормального функционирования многих белков, включая транспорт кислорода, производства энергии, и детоксикации. Порфирины принимают участие в детоксикации токсинов. Повышение уровня порфиринов коррелируют с повышением уровня токсических нагрузок на организм.

Определение уровня порфиринов особенно хорошо подходит для оценки токсической нагрузки тяжелыми металлами. Во-первых, гемовый путь является постоянно меняющимся путем, который активен почти в каждой клетке тела. Любое нарушение в пути, как правило, вызывает быстрое и относительно большое скопление промежуточных метаболитов, таких как порфирины. Во-вторых, ферменты пути широко распространены в тканях человека и чрезвычайно чувствительны к присутствию различных токсинов, создавая большое накопление порфиринов в гемовом пути и их экскрецию с мочой.

Порфирины и аутизм

Многочисленные исследования показывают, что измерение уровня порфиринов в моче является информативным для определения токсического воздействия ртути на организм детей с РАС, а также эффективности проводимой хелатной терапии.

Porphyrin Pathway Intermediates	Промежуточные метаболиты порфиринов	Перечень токсических соединений, которые повышают уровень порфиринов
Uroporphyrin I & III	Уропорфирин I & III	Мышьяк, аллюминий, гексахлоробензен, диоксин, полиброминиловый бифенил, хроническая алкогольная интоксикация
Heptacarboxyporphyrin	Гептакарбоксипорфирин	Мышьяк, гексахлоробензен, диоксин, полиброминиловый бифенил, хроническая алкогольная интоксикация
Hexacarboxyporphyrin	Гексакарбоксипорфирин
Pentacarboxyporphyrin	Пентакарбоксипорфирин	Ртуть, мышьяк
Precoproporphyrin	Прекопропорфирин	Ртуть
Coproporphyrin I	Копропорфирин I	Мышьяк, свинец, метилхлорид, поливенилхлорид, полиброминиловый бифенил, хроническая алкогольная интоксикация
Coproporphyrin III	Копропорфирин III	Аллюминий ртуть, свинец, метилхлорид, поливенилхлорид, полиброминиловый бифенил, хроническая алкогольная интоксикация
Calculated Values	Расчетные значения
Total Porphyrins	Общее количество порфиринов	Маркер общей токсической нагрузки
Precopro/Uro I & II	Прекопро/Уро I & II	Ртуть
Copro I/Copro III	Копро I/Копро III	Мышьяк

Инструкция по забору материала

Проверьте ваш набор:

1 пластиковая пробирка янтарного цвета с белой крышечкой с консервантом

1 гелевый пакет для заморозки

1 полиэтиленовый пакет для биологического материала и впитывающая салфетка

Перед началом теста

• Нет необходимости прекращения приема лекарственных препаратов для этого теста.
• Уменьшить потребление жидкости накануне забора анализа, чтобы избежать чрезмерного разбавления мочи.
• Женщины не должны собирать мочу во время менструации.

ВНИМАНИЕ. Не разливайте жидкость из пробирок. Избегайте попадания ее в глаза и на кожные покровы. При попадании в глаза, промойте их водой в течение 15 минут. При попадании на кожу, помойте этот участок водой и мылом. Не вдыхайте и не пейте эту жидкость. При попадании внутрь, немедленно свяжитесь со своим лечащим врачом.

Проведение теста

• Опорожните мочевой пузырь перед сном.
• Соберите первую утреннюю мочу в чистую емкость.
• Используя пипетку, заполните пробирку янтарного цвета с белой крышечкой мочой до уровня на 1 см ниже крышечки (10 мл). Закрутите плотно крышечку и переверните несколько раз пробирку. Напишите дату забора на этикетке пробирки.
• Оберните абсорбционную салфетку вокруг пробирки и поместите её в полиэтиленовый пакет. Убедитесь, что пакет плотно закрыт. Если нет возможности отправить материал, храните образец материала в холодильнике. Это обеспечит стабильность образцу.
• В пластиковый пакет с пробиркой поместите замороженый гелевый пакет.
• Выбросите пипетку, вылейте мочу.
• Доставьте материал в офис клиники.

Показания для проведения теста Профиль порфиринов в моче (в скобках указаны коды заболеваний согласно 10МКБ) :

1. Аутоимунные заболевания.

2.Предраковые и раковые заболевания.

3.Аллергические заболевания.

4.Дерматологические заболевания

5.Заболевания сердечно-сосудистой системы:

• ИБС (I20-25)
• Цереброваскулярные болезни (I60-I69)
• Атеросклероз (I25.0)

6.Заболевания ЦНС:

• Системные атрофии, поражающие преимущественно центральную нервную систему (G10-G13)
• Дегенеративные заболевания ЦНС (G30-G32)
• Расстройства сна (G47)

7.Психические расстройства и расстройства поведения:

• Депрессии (F32)
• Анорексия (R63.0)
• Аутизм (F84.0)
• Эмоциональные расстройства и расстройства поведения, начинающиеся обычно в детском и подростковом возрасте (F90-98)

8.Синдром хронической усталости (F48.0)

9.Токсическое действие металлов (T56)

10.Токсическое действие органических растворителей (T52)